. Возбудитель дифтерии

1.  Морфология возбудителя дифтерии

2.  Биология возбудителя дифтерии

3.  Серотипы дифтерийных бактерий

1.  Возбудитель дифтерии  Corynebacterium diphtheriae выделен в чистой культуре Леффлером в 1884 г.

Размеры дифтерийной палочки: длина 1—6 мкм, толщина 0,3— 0,8 мкм. Отличительной особенностью возбудителя дифтерии является многообразие форм — наряду с длинными изогнутыми, изящными "типичными" палочками микробов встречаются ко­роткие толстые с колбовидными вздутиями на концах, иногда коккообразные клетки, что придает микробу сходство с була­вой. В колбовидных вздутиях часто находят волютиновые зер­на (тельца Бабеша-Эрнета).

Характерен общий вид препарата, особенно если мазок взят с большим количеством микробов. Микробы лежат большими скоплениями и напоминают пакет булавок. В окрашенных мазках могут быть расположены попарно, под острым или прямым углом друг к другу, напоминая римскую цифру V. Дифтерийные микробы неподвижны, спор не образуют, жгу­тиков не имеют, грамположительные, хорошо окрашиваются основными анилиновыми красками, причем особенно интен­сивно окрашиваются волютиновые зерна. При окрашивании по Кецссеру характерной особенностью является то, что зерна волютина окрашиваются в сине-черный цвет, контрастирующий со светло-коричневой окраской всей микробной клетки.

2.  Биология: дифтерийные микробы хорошо развиваются при сво­бодном доступе кислорода; растут при температуре от 15 до 40 °С. Могут расти на обычных питательных средах, но лучше и с характерной морфологией развиваются на средах, содер­жащих кровь или сыворотку любого вида животного. На этих средах дифтерийные бактерии вырастают уже через 8—10—12 ч.

Наиболее распространены:

 

·  свернутая лошадиная сыворотка (среда РУ);

•  среда Леффлера (3 части сыворотки + 1 часть мясного бульона с 1% виноградного сахара, 1% пептона);

•  теллуритовые среды.

Очень характерен общий вид роста дифтерийных микробов в пробирках на скошенных свернутых сывороточных средах: ко­лонии не сливаются вместе, вся культура представляется усе­янной зернышками, напоминая шагреневую кожу. Колонии круглые, гладкие или слегка зернистые, непрозрачные с полу­прозрачной периферией, края ровные, но впоследствии стано­вятся извилистыми или даже зазубренными. На теллуритовых средах дифтерийные палочки образуют темно-серые или чер­ные колонии вследствие восстановления теллурита до метал­лического теллура. Восстановление происходит внутри бакте­риальной клетки.

Типы дифтерийных микробов. На основании культуральных свойств различают 3 типа дифтерийных микробов:

•  gravis (тяжелый);

•  mitis (средний);

•  intermedius (промежуточный).

Тип гравис дает зернистый осадок и пленку на бульоне, на плотных средах образует плоские матовые колонии неправиль­ных очертаний, напоминающие маргаритку. Тип митис равно­мерно мутит бульон и образует выпуклые полупрозрачные ко­лонии. Третий тип обладает некоторыми свойствами первого и второго типов. Часто встречаются также атипичные формы. У дифтерийных бактерий, как и у других микроорганизмов, на­блюдаются:

•  гладкие (S) формы колоний;

•  шероховатые (R) формы;

•  промежуточные (RS).

У высокотоксичных штаммов обычно преобладают R-формы. Дифтерийная палочка вырабатывает кислоту без газообразова­ния в средах с глюкозой, мальтозой и галактозой, но не с лак­тозой, сахарозой и маннитом. Сбраживание крахмала и глико­гена считают характерной особенностью типа гравис. Многие штаммы дают гемолиз на кровяном агаре и лизируют эритро­циты, добавленные к культуре.

Дифтерийные бактерии чувствительны к дезинфицирующим средствам: 10%-ная перекись водорода убивает их в течение 3 мин; 1%-ная сулема, 5%-ная карболовая кислота, 50— 60%-ный  алкоголь —  в течение   1 мин.  Низкие температуры  (до -190 °С) не убивают дифтерийные бактерии длительное время. Высокая температура приводит к быстрой их гибели. Под действием прямого солнечного света палочки дифтерии гибнут в течение нескольких дней. В пыли они сохраняют жизнедеятельность до 5 недель, в воде и молоке до 6—20 дней. В трупах сохраняются до 2 недель.

3. Серотипы. Дифтерийные бактерии гетерогенны по антигенной структуре, но все вырабатывают одинаковый токсин. Серологи­ческая гетерогенность наблюдается в пределах одного типа. Между 3 типами — гравис, митис и интермедиус — серологиче­ская связь отсутствует. Токсин, продуцируемый всеми 3 типа­ми дифтерийных микробов, тождествен и хорошо нейтрализу­ется обычными противодифтерийными сыворотками. Среди дифтерийных микробов имеются токсичные и нетоксичные штаммы. Дифтерию вызывают только токсичные штаммы, об­ладающие способностью продуцировать экзотоксины. Степень токсичности дифтерийных микробов может быть раз­личной. Единицей измерения силы токсина служит минимальная смертельная доза — наименьшее количество токсина, убиваю­щее морскую свинку массой 250 г в течение 3—4 суток. Кроме экзотоксина дифтерийная палочка продуцирует дермонекроток-син, гемолизин, нейраминидазу и гиалуронидазу.

 

Вопрос 51. Лабораторная диагностика дифтерии

/. Забор и посев материала

2.  Бактериоскопическое и бактериологическое исследования

3.  Реакции ферментации углеводов

1. Лабораторная диагностика дифтерии производится с иелью:

•  постановки диагноза острого заболевания;

•  установления бациллоносительства;

•  определения вирулентности (токсичности) дифтерийных палочек.

Материал для исследования (чаще всего мазок из носа) берут стерильным ватным тампоном. Не следует брать материал после приема пищи или полоскания дезинфицирующими растворами.

Посев необходимо произвести сразу после взятия материала (не позже 5—6 ч) в пробирку со свернутой кровяной сывороткой и сывороткой Леффлера, а затем поставить в термостат при 37 °С.

2.  Бактериоскопическое и бактериологическое исследования

Через 18—20 ч роста в положительных случаях на поверхности среды видны многочисленные бисерные, близко расположен­ные друг к другу колонии. Предварительный диагноз можно дать уже через 8 ч. Материал с тампона можно засеять на чаш­ку с кровяным теллуровым агаром или на среду Клауберга II. Колонии, выросшие на чашках через 24—48 ч, изучают микро­скопически и отсевают на чашки Петри со специальной средой для определения токсичности. На следующие сутки учитывают результаты посева культур на средах для определения токсично­сти и биохимических свойств и микроскопируют чистую культуру со свернутой сыворотки. Если выделена разлагающая углеводы нетоксичная культура, необходимо поставить дополнительные пробы на цистиназу и реакцию агглютинации с политиповой дифтерийной сывороткой. Реакцию агглютинации ставят на стекле с помощью монотиповых дифтерийных сывороток.

3. Для идентификации чистой культуры дифтерийной палочки и дифференцировки ее от псевдодифтерийной палочки  Гормана

исследуют биохимические свойства выделенной чистой культуры. Исследование проводится на средах Yucca или на водно-сывороточной среде (20%-ной лошадиной сыворотке).

Дифтерийная палочка расщепляет только глюкозу — имеет только столбик, дифтероиды ферментируют глюкозу и сахарозу — синий цвет будет у всей среды, ложнодифтерийная палочка не расщепляет Сахаров, но разлагает мочевину — вся среда приоб­ретает оранжевый цвет.

На основании реакций ферментации углеводов можно также установить 2 основных биологических типа дифтерийной па­лочки: гравис и митис.

Формулировка окончательного ответа при положительном ана­лизе: "Выделены токсичные (нетоксичные) дифтерийные палоч­ки", в случае изучения культурально-биохимических признаков указывается принадлежность к типу гравис или митис, а при серотипировании культуры указывается серологический тип.