Возбудитель туляремии

1.  Морфологические и культуральные свойства возбудителя туляремии

2.  Устойчивость к физическим и химическим факторам

3.  Антигенное строение

4.  Патогенность возбудителя туляремии

1. Для туляремии (Francisella tularensis) как одной из природно-очаговых зоонозных инфекций характерна триада биоиеноза:

 

·  возбудитель;

•  резервуары возбудителя;

•  переносчики — кровососущие насекомые. Выделяют 3 подвида туляремийного микроба:

•  неарктический (американский);

•  среднеазиатский;

•  голарктический (европейско-азиатский).

Неарктический подвид бактерии, в отличие от остальных, ха­рактеризуется высокой патогенностью для человека и лабора­торных животных.

Морфология: туляремийные бактерии имеют очень мелкие раз­меры — 0,3—0,5 мкм, способные проходить через некоторые бактериальные фильтры. При культивировании на искусствен­ных питательных средах микроб туляремии обычно имеет фор-. мы очень мелкого кокка, а в органах животных чаще встреча­ется в виде коккобактерий.

В культурах на питательных средах бактерии туляремии обна­руживают полиморфизм, особенно выраженный у американ­ской разновидности. Микроб неподвижен, спор не образует, имеет небольшую капсулу. В культурах характерно образова­ние бактериями слизи, легко обнаруживаемой при изготовлении мазков на стекле. Бактерии туляремии окрашиваются все­ми красками, обычно применяемыми в лабораторной практи­ке, но заметно бледнее, чем многие бактерии. По Граму туляремийные бактерии окрашиваются отрицательно. Мазки-отпечатки из органов окрашиваются по Романовскому-Гимзе, при этом туляремийные микробы отличаются от другой (посторонней) флоры более нежной фиолетовой окраской и более мелкими размерами.

Биология, культуральные свойства: микроб туляремии прихот­лив в отношении выращивания на искусственных питательных средах. Он не растет на обычном мясо-пептонном агаре или бульоне. Микробы удается культивировать на желтковых сре­дах при добавлении цистина и других питательных веществ, особенно крови. Температурный оптимум 36—37°С. Строгие аэробы. Изолированные колонии удобно получать при посеве на чашки со средой Емельяновой (гидролизат рыбной муки, же­латин, дрожжи, хлористый натрий, глюкоза, цистин, агар) или средой Френсиса — (мясо-пептонный агар с 1%-ным пептоном, 0,5%-ный хлористый натрий, цистин, глюкоза).

После стерилизации эти среды добавляют к 5—10 мл кроличьей дефибринированной крови. Колонии на этих средах — белова­того цвета с голубоватым оттенком, круглые, с ровным краем, выпуклые, гладкие, блестящие, при разреженном посеве они достигают (через несколько дней) 1—2 мм и более в диаметре.

В жидких питательных средах туляремийный микроб размно­жается хуже, причем рост отмечается лишь на поверхности среды, что связано с аэрофильностью бактерии. Хорошие ре­зультаты выращивания можно получить либо при добавлении к жидким средам коллоидов (куриного желтка, агара и т. д.), либо при аэрации среды. Способность сбраживать углеводы и спирты у микроба туляремии ограниченна. Туляремийные микробы ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, а в ря­де случаев — левулезу и маннозу. Лактозу, сахарозу, маннит и ряд других веществ туляремийные бактерии не ферментируют.

2. Устойчивость к физическим и химическим факторам: во внеш­ней среде возбудитель сохраняется длительное время, особенно при низких температурах: в зерне и соломе при температуре ниже 0 °С до 6 мес, в замерших трупах животных — до 8 мес. В естественных условиях обнаруживали возбудители туляремии в воде ручьев, колодцев, а также в соломе и других объектах, это имеет важное эпидемиологическое значение. Туляремийные бактерии нестойки к высоким температурам — кипячение не­медленно убивает микробов, а нагревание до 60 °С обусловли­вает их гибель в течение 20 мин. Под действием прямых сол­нечных лучей туляремийные бактерии погибают через 20-30 мин, на рассеянном свету жизнеспособность их сохраняется до 3 дней.

Микроб туляремии нестоек к обычным дезинфицирующим веще­ствам - лизолу, фенолу, хлору, сулеме. Особенно чувстви­тельны бактерии к этиловому спирту и при его воздействии погибают менее чем за минуту.

3.  Антигенное строение: туляремийный микроб содержит 2 анти­генных комплекса:

•  оболочечный (Vi);

•  соматический (О).

С оболочечным антигеном связаны вирулентность и иммуно-генные свойства возбудителя. При Vi-агглютинации, характер­ной для вирулентных культур, на дно пробирки в осадок выпа­дает стойкий агглютинат, при встряхивании легко разбиваю­щийся на мелкие хлопья; при О-агглютинации, свойственной полностью авирулентным культурам, в осадок выпадает не­стойкий агглютинат, при встряхивании легко разбивающийся на мелкие хлопья или почти гомогенную взвесь. Туляремийные бактерии обнаруживают антигенную близость с бруцеллами: специфическая туляремийная агглютинирующаяся сыворотка высокого титра может в небольших разведениях агг­лютинировать бруцелл, а бруцеллезная сыворотка - туляре­мийные бактерии. Некоторые сапрофитные бактерии также обладают способностью частично агглютинироваться туляре-мийной сывороткой. У музейных штаммов туляремийных бак­терий может наблюдаться бактериофагия, но этот феномен можно обнаружить лишь при посеве на чашки со специально подобранными средами.

4.  Патогенность. Штаммы туляремийных бактерий, выделяемые в природных очагах от грызунов, клещей и других объектов, а также от больных людей, обладают в высокой степени сходны­ми признаками, включая вирулентность. Различия обнаружива­ются лишь между штаммами - американским и европейскоазиатским. При культивировании на искусственных питатель­ных средах происходит превращения туляремийных бактерий из вирулентной S-формы в авирулентную R-форму, их обозна­чают как SR-вариант. Они обладают остаточной вирулентно­стью для чувствительных к туляремии животных, например белых мышей.

Болезнетворные свойства туляремийного микроба в основном связаны с токсическими веществами, представляющими собой эндотоксин. Микроб туляремии патогенен для многих видов млекопитающих, и особенно грызунов, но степень его пато-генности не для всех видов одинакова.

Наибольшую восприимчивость и чувствительность к туляре­мии проявляют полевки, водяные крысы, зайцы, хомяки, до­мовые мыши и другие грызуны и насекомые. У этих животных даже при минимальных дозах заражения заболевание протекает по типу острой септицемии, они выделяют возбудителя в большом количестве с мочой и калом и погибают с необычай­но интенсивным обсеменением бактериями внутренних орга­нов и крови.

 

Вопрос 67. Лабораторная диагностика туляремии людей

/. Особенности лабораторной диагностики туляремии

2.  Бактериоскопия

3.  Серологические исследования

4.  Проба с тулярином

5.  Биологический метод

1.Организм человека восприимчив к туляремии. У человека туля­ремия — лихорадочное заболевание с относительно доброкаче­ственным течением, не представляющее опасности заражения для окружающих. Летальность при туляремии в России ниже 0,5% (без лечения). Для диагностики туляремии у больного вполне достаточно применения 2 реакций, кожной пробы и ре­акции агглютинации. Другие иммунологические реакции тех­нически более сложны (например, реакция связывания ком­племента).

Выделение от больного культуры возбудителя доступно лишь специально оснащенным лабораториям и применяется в основном с исследовательскими целями. Для обнаружения туля-ремийных бактерий в органах животных и объектах внешней среды в лабораторной практике чаще всего используют бакте­риологические методы исследования материала. Грызунов, кро­вососущих членистоногих доставляют в лабораторию для иссле­дования с соблюдением предосторожностей, предусмотренных правилами работы с особо опасными инфекциями.

Бактериологический метод для диагностики заболевания у че­ловека по сравнению с биологическим методом малоэффекти­вен, так как в организме больного человека туляремийные микробы содержатся в скудном количестве. Для выращивания туляремийных бактерий используют специальные среды, так как на простых питательных средах (мясо-пептонном агаре, бульоне) этот микроб не растет, обычно применяется сверну­тая желточная среда, рыбно-глюкозо-цистиновый агар и агар с добавлением крови. При массивном обсеменении органов рост культуры туляремийных бактерий появляется через 18—24 ч в виде нежного синего налета на поверхности среды.

2. Бактериоскопия: ввиду очень мелких размеров туляремийного микроба он может быть с достоверностью обнаружен в мазках-отпечатках из патологического материала только при обильном обсеменении последнего. При изготовлении мазков-отпечатков используют окраску по Романовскому-Гимзе. Путем бактерио­скопии (в сочетании с реакцией преципитации) может быть получен быстрый (через 2—3 ч) положительный ответ при ис­следовании доставленных грызунов. Однако он является лишь предварительным, так как положительные результаты бакте-риоскопического исследования должны быть подтверждены выделением культуры.

3. Серологические исследования: из серологических методов иссле­дования применяют реакцию агглютинации по общепринятой методике с использованием туляремийного диагноста. Диагно­стическим считается титр 1 : 100 и выше. Более чувствительной является реакция непрямой гемагглютинации, применяемая как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. В ка­честве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум.

Ускоренный метод серологической диагностики туляремии. Для той цели применяют кровяно-капельную реакцию на стекле. В качестве антигена используют обычный туляремийный диагностикум. В положительных случаях при наличии у больного титра сыворотки 1 : 100 и выше агглютинация на стекле насту­пает немедленно после смешения крови с антигеном. Для ускоренной диагностики туляремии у людей может быть использована также микросерореакция. Для ее постановки на предметное стекло наносят не каплю крови, а каплю сыворот­ки крови обследуемого больного и к ней добавляют столько же антигена. Положительная микрореакция на стекле может слу­жить для предварительной ориентации в диагнозе.

4. Аллергическая реакция строго специфична, у больных туляреми­ей людей она становится положительной при всех химических формах туляремии и, как правило, опережает реакцию агглю­тинации. Проба состоит во введении внутрикожно в область предплечья,  передней  поверхности 0,1  мл  тулярина  (взвесь убитых туляремийных микробов). Оценку пробы производят через 24, 48 и 72 ч. Проба является положительной при появ­лении отека или инфильтрата. Гиперемия без отека, исчезающая через сутки, диагностического значения не имеет. Внутрикож-ную пробу применяют и для ретроспективной диагностики ту­ляремии. Надо иметь в виду, что проба с тулярином бывает положительной у лиц, подвергшихся прививкам туляремийной вакциной. Вместо внутрикожной пробы пользуются накожной пробой:  нанесением двух капель антигена на ладонную по­верхность предплечья с последующими поверхностными на­сечками и легким втиранием антигена. В положительных случаях через 24—36 ч появляются гиперемия и отечность, сохраняю­щиеся 2—3 дня.

5.  Биологический метод является самым чувствительным способом обнаружения туляремийных бактерий в любом исследуемом ма­териале. Биологический метод исследования заключается в за­ражении   лабораторных   животных   (морская   свинка,   белая мышь) результатом бубонов, взятым до 14—20-го дня болезни; соскобом со дна язвы, смешанным с физиологическим раство­ром, полученным до 8—12-го дня, отделяемым конъюнктивы, взятым до 15—17-го дня болезни; кровью 5—6 мл, взятой до 6-го дня болезни. Исследуемый материал вводят подопытным животным подкожно или внугрибрюшно. Зараженные живот­ные погибают от туляремии в течение 4—14 дней. Кусочки пе­чени,  селезенки, лимфатического узла и кровь засевают на желточную среду для выделения возбудителя.