Морфология и биология возбудителя сибирской язвы

/. Морфологические свойства возбудителя сибирской язвы

2. Биология сибиреязвенного возбудителя, кульгпуральные свойства

1. Сибирская язва — тяжелое острое инфекционное заболевание человека и животных, которое вызывает сибиреязвенная споро-образующая палочка (Bacillus anthracis). В зависимости от пер-винного проникновения и последующей локализации этого микро­организма развиваются:

·  кожные;

•  висцеральные (легочная и кишечная);

•  висцерально-генерализованные клинические формы болезни. Сибирская язва может возникать на всех континентах и во всех странах в связи с производством, потреблением и обра­боткой животного сырья (мясо, шерсть, шкуры и т. п.) и ухо­дом за больными животными.

Морфология: это крупный (1-2 х 6-10 мкм) палочковидный неподвижный микроорганизм, с обрубленными под прямым углом концами. В организме встречаются как единичные ин­капсулированные палочки, так и их цепочки из 2-3 микробов, окруженные общей капсулой. В последнем случае концы сли­ваются и цепочка напоминает собой бамбуковую трость. Си­биреязвенные бациллы хорошо окрашиваются анилиновыми красками, грамположительные. Капсулы бывают отчетливо видны при окраске по Романовскому- Гимзе. Для выявления спор используют метод Циля-Нильсена.

2. Возбудитель сибирской язвы неприхотлив и может развиваться на различных лабораторных средах — на мясо-пептонном агаре и бульоне, желатине, молоке, экстрактах из семян растений, различных углеводных средах и даже настое сена. Палочка си­бирской язвы является факультативным аэробом, поэтому на бактериологических питательных средах, при температуре 37-38 "С, хорошо растет при свободном доступе кислорода.

На поверхности мясопептонного агара возбудитель сибирской язвы вырастает в виде типичных матового цвета, шероховатых бескапсульных колоний, состоящих из сплетений нитей с от­ростками ("львиная грива", "голова медузы"). Гладкие, слизи­стые полупрозрачные колонии вырастают на поверхности при 80 °С на лошадиной сыворотке, отдельные палочки и цепочки колоний снаружи покрыты капсулой.

В мясо-пептонном бульоне бактерии сибирской язвы дают рост в виде комка ваты на дне пробирки, без помутнения среды. Капсулы при этом не образуются. Капсульная форма этого микроба является вирулентной. Оптимум роста находится в пределах 36 °С.                                •

При истощении и высыхании среды вегетативные формы мик­роба переходят в споровые. При этом в каждой палочке образует­ся одна центральная спора. Обязательным условием спорооб­разования является доступ кислорода и температура в пределах 12-2 "С. В организме человека и в невскрытом трупе споры не образуются. Вегетативные формы без кислорода растут очень медленно. При посеве уколом в столбик агара или желатина растет "елочной верхушкой вниз"; верхняя часть желатина раз­жижается ("пуговка") протеолитическим ферментом. На кровяном агаре — рост без гемолиза. Молоко свертывается на 2—4-е сутки с последующей пептонизацией. Большинство штаммов разлагают галактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу (медленно), левулезу с образованием кислоты без газа. Сероводород образуется не всегда. При повышении щелочно­сти в бульонной культуре может иметь место помутнение. От­дельные штаммы одновременно с образованием типичного осадка на дне сосуда с жидкой средой могут вызывать умерен­ное помутнение жидких сред.

Вирулентность возбудителя сибирской язвы связана с капсулой в организме инфицированных животных. Капсула не только пре­дотвращает фагоцитоз возбудителя, защищает его от воздейст­вия бактерицидных веществ инфицированного организма, но и способствует фиксации капсульных бацилл на клетках, кото­рые затем подвергаются дегенерации и гибели. Бескапсульные сибиреязвенные бациллы этими свойствами не обладают. Вирулентность бацилл антрацис обусловлена также образова­нием ими токсина как капсульными, так и бескапсульными штаммами.

В теле возбудителя сибирской язвы содержится термостабиль­ный "соматический" антиген полисахаридной природы, сохра­няющийся длительное время в трупном материале; в капсуле обнаружен протеиновый антиген — полипептид D-глютами-новой кислоты.

Исключительный интерес представляет наследственно изменен­ные штаммы возбудителя сибирской язвы — мутанты, утра­тившие способность образовывать специфическую капсулу, превратившиеся из высоковирулентных штаммов в вакцинные штаммы, что используется для практических целей. Из наследственно измененных авирулентных штаммов изготавливают иммунопрофилактические вакцины, применяемые в медицин­ской и ветеринарной практике.

Вопрос 73. Устойчивость и диагностика возбудителя сибирской язвы

1.  Устойчивость к физико-химическим факторам

2.  Лабораторная диагностика

1. Вегетативные формы микробов без доступа кислорода относи­тельно быстро отмирают, особенно под влиянием гнилостной флоры.

Они быстро погибают при нагревании до 50 °С в течение 30 мин, при температуре 75—80 °С — через минуту, а при воздействии различных дезинфицирующих средств — от действия сулемы, формальдегида, хлора в обычных концентрациях — гибель воз­будителя наступает через несколько минут. К низкой темпера­туре бациллы сибирской язвы весьма устойчивы. Сибиреязвенные споры высокоустойчивы во внешней среде. В воде сохраняются жизнеспособными в течение нескольких лет, в почве — десятки лет; сухой жар губит их при 140 °С за 3 ч, ки­пячение — через 45—60 мин. Споры устойчивы и к дезинфици­рующим средствам; в шкурах животных, выделанных дублением, они могут сохраняться живыми длительное время, засаливание мяса не уничтожает спор.

Выявление специфических свойств и отношения возбудителя к внешней среде имеет большое значение в связи с трудностями дифференциальной диагностики. В природе широко распро­странены ложносибиреязвенные палочки, которые морфологиче­ски невозможно отличить. Помимо этого имеются и другие спорогенные аэробы, такие, как сенная, картофельная, капу­стная и корневидная палочки, которые могут находиться в раз­личных объектах среды. Из старых лабораторных культур, почвы и сточных вод выделен специфический сибиреязвенный фаг, используемый для дифференциальной лабораторной диаг­ностики возбудителя сибирской язвы.

2. Лабораторная диагностика сибирской язвы состоит:

•  в бактериоскопии нативного материала;

•  посеве его на питательные среды;

•  заражении животных (биологическая проба);

•  постановке реакции термопреципитации по Асколи.

Для диагностики сибирской язвы у больных и ретроспективно­го анализа используют внутрикожную пробу с антраксилом. Для лабораторного исследования от больного в стерильную по­суду берут содержимое пустулы, гной, отделяемое карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения, рвотные массы, соблюда­ют при этом правила работы с особо опасными инфекциями. Исследование начинают с бактериоскопии мазков, окрашенных по Граму и анилиновыми красками. Окраску мазков произво­дят также раствором Ребигера на предмет обнаружения кап-сульных форм бацилл сибирской язвы — капсулы окрашивают­ся в красно-фиолетовый цвет, бактерии — в темно-фиоле­товый. Для бактериологического исследования материал засе­вают в чашки Петри на мясо-пептонный агар и в пробирки с мясо-пептонным бульоном. Через 24 ч выращивания в термо­стате при 37 °С в положительных случаях на поверхности агара можно видеть матовые шероховатые колонии с ворсистыми краями типа "львиной гривы", в пробирках с мясо-пептонным бульоном сибиреязвенный возбудитель растет на дне пробирки в виде комка ваты. Выделенные культуры в мазках исследуют под микроскопом на морфологию и в висячей капле — на под­вижность.

Биологическая проба: окончательное подтверждение видовой принадлежности выделенной культуры устанавливают путем подкожного заражения белых мышей, морских свинок, кроли­ков эмульсией из однодневной агаровой культуры. Наблюде­ние за животными проводят 10 дней. Павших животных вскрывают: делают мазки-отпечатки из внутренних органов для микроскопирования, производят посевы из крови, сердца, селезенки и инфильтрата на месте инъекции.

Для ускоренной диагностики сибиреязвенной инфекции исполь­зуют иммунофлюоресцентный метод. Этот метод состоит в об­работке мазков культур микробов люминесцентными сыворот­ками и просмотре их в люминесцентном микроскопе — бациллы сибирской язвы выглядят в виде палочек с ободком, светя­щимся зеленом цветом. Лаборатория может дать предваритель­ное заключение по исследуемому материалу через сутки после его получения и окончательное — через 3—4 дня после резуль­татов постановки биологической пробы.

Реакцию термопреципитации по Асколи проводят с целью обнару­жения сибиреязвенного антигена. Для этого измельчают кусочки органов трупа, кожи, шерсти животных и кипятят в физиоло­гическом растворе 10—15 мин. Полученный термоэкстракт фильтруют. Фильтрат наслаивают на преципитирующую сыво­ротку, разлитую в узкие пробирки. В положительных случаях на границе обеих жидкостей появляется мутно-белое кольцо преципитации.

Аллергическая проба состоит во внутрикожном введении 0,1 мл антраксина — антигена, извлекаемого из оболочки сибиреяз­венного возбудителя. На месте введения у больных и перебо­левших сибирской язвой появляются гиперемия и инфильтрат размером 3,5 х 3 см.