Возбудители кокковых пневмоний и их лабораторная диагностика

/. Возбудители пневмоний

2.  Микроскопическое исследование

3.  Бактериологическое исследование

4.  Особенности лабораторной диагностики стафилококковых пневмоний

1.  Возбудителями пневмонии могут быть различные микроорганиз­мы, проникающие в дыхательные пути человека из окружающей среды, — кокковые (пневмококки, стрептококки, стафилокок­ки)   и   бациллярные   (диплобациллы   Флидлендера,   палочки Пфейффера). Одним из наиболее частых возбудителей пнев­монии, особенно крупозной, является пневмококк. В последнее время часты стафилококковые пневмонии.

2.  Материалом для исследования служат: мокрота, слизь, взятая стерильным тампоном из носоглотки больного, гной, различ­ные выпоты, пунктаты, кровь. Исследованию подвергают пре­имущественно мокроту или носоглоточную слизь.

Микроскопическое исследование: делают мазки на 2 предметных стеклах; один из мазков окрашивают по Граму, а другой — раз­веденным карболовым фуксином (краска Пфейффера). При на­хождении в мазках ланцетовидных диплококков, окруженных светлой зоной неокрасившейся капсулы, ориентировочно ус­танавливают пневмококковую этиологию. Обнаружение распо­ложенных цепочкой грамположительных кокков позволяет по­давить предварительный диагноз стрептококковой инфекции.

Характерная морфология расположения группами в виде гроз­дей винограда и положительной окраски по Граму позволяет установить наличие стрептококков. Обнаружение в мазках мелких грамотрицательных палочек, часто образующих гнезд-ные скопления и нередко полярно окрашенных, указывает на палочку Пфейффера. Грамотрицательные диплобациллы различ­ной величины, окруженные капсулой в виде светлого ореола, говорят о наличии диплобациллы Фридлендера. Микроскопиче­ский диагноз ориентировочный и предварительный.

3. Точное представление о микробном пейзаже дает:

·  изучение посевов на кровяном агаре и других средах;

•  выделение чистых культур из изолированных колоний;

•  идентификация их.

Пневмококковые пневмонии: для бактериологического иссле­дования материал засевают на чашки Петри, содержащие агар с добавлением 5—7% дефибринированой кроличьей крови. По­севы на кровяном агаре исследуют через 1—2 суток содержания в термостате при 37 °С.

Одновременно с изучением внешнего вида колоний произво­дят отсев их в жидкие среды и микроскопирование. Колонии пневмококков на кровяном агаре имеют вид мелких полупро­зрачных образований зеленовато-серого цвета, особенно за­метного в тонком слое агара, в центре имеют небольшой плот­ный бугорок и более светлую периферию. Нередко колонии окружены как бы отсвечивающим ореолом. В жидких средах пневмококки вызывают равномерное помутнение без образо­вания пленок и осадка.

Микроскопирование обнаруживает грамположительные парные кокки несколько удлиненной формы с заостренными наруж­ными концами, напоминающими ланцет — ланцетивидные ди­плококки. Размеры их колеблются в пределах 0,5 х 0,75 до 1 х 1,5 мкм, располагаются одиночно, но могут образовывать ко­роткие цепочки по 3—4 пары кокков. Пневмококки образуют капсулу, которая светлым ободком окружает оба кокка вместе, так как обычными методами окраски капсула не прокрашива­ется. Пневмококки легко лизируются в присутствии бычьей желчи и желчнокислых солей. Обнаруженные при исследова­нии культуры пневмококка подвергают дополнительному исследованию - определяют тип пневмококка, вирулентность для белых мышей и устойчивость к действию антибиотиков, а также производят серологические исследования (реакции агг­лютинации и преципитации — берется материал от больного и типовые пневмококковые сыворотки). Одновременно с посе­вом на агар исследуемый материал вводят внутрибрюшинно 2 белым мышам весом 18—20 г по 0,5 мл, т. е. ставят биологи­ческую пробу.

4. Стафилококковая пневмония. Бактериологическое исследование

проводится с использованием молочно-солевого и кровяного агара. Для обнаружения стафилококков пользуются материа­лом (пунктат, выпоты, гной, экссудат), взятым непосредствен­но из очага болезни (плевральные и легочные полости), а также посевами крови, производимыми в строго стерильных условиях. Исследования слизи из зева и носа имеют второстепенное значе­ние и лишь дополняют общую картину. 2-3 капли исследуемо­го материала помещают на поверхность чашки, содержащей молочно-солевой агар, посевы помещают в термостат при 37 "С. Посевы крови сохраняют в термостате до появления роста (помутнении). Если в течение 4—5 дней роста микробов не обнаруживается, считают отрицательными и уничтожают. Через сутки роста посевы извлекают из термостата и выросшие культуры подвергают изучению.

Колонии стафилококков на твердых средах представляют собой правильные диски с ровными краями, блестящей, умеренно выпуклой поверхностью, размером от 2 до 4 мм в диаметре. Колонии легко снимаются с агара, немного тягучи, непрозрач­ны, окрашены в золотисто-оранжевый, лимонно-желтый или белый цвет. На кровяном агаре патогенные штаммы стафило­кокков, как правило, окружены зоной более или менее выра­женного гемолиза. В жидких средах стафилококки вызывают сильное диффузное помутнение, некоторые штаммы с образо­ванием пленки. При стоянии пробирки на дне образуется оса­док. Стафилококки грамположительньь

Под микроскопом стафилококки представляют собой довольно правильные сферические кокки с диаметром 0,6 до 0,9 мкм. Располагаются одиночно, попарно и даже короткими цепочка­ми по 2—4 кокка, но основной формой являются неправиль­ные скопления, напоминающие гроздья винограда.

Патогенные штаммы выглядят, как правило, лиловыми, а не­патогенные — интенсивно синими. Выделенные из одной ко­лонии штаммы культур стафилококка исследуют на патоген­ные свойства и чувствительность к антибиотикам. Из посевов крови ежедневно делают высевы на гемоагар и выделенные культуры подвергают тем же исследованиям. Понятие о патогенности стафилококковой культуры складыва­ется из комплекса свойств изучаемого штамма:

•  способности вырабатывать пигмент;

•  вызывать гемолиз эритроцитов;

•  коагулировать плазму крови;

•  вырабатывать экзотоксин;

•  лизироваться типовыми фагами.

Косвенным показателем патогенных стафилококков является их способность лизироваться типовыми стафилококковыми фагами, так как известно, что непатогенные штаммы не лизи-руются.

Серологическое исследование — наибольшее распространение получило определение уровня стафилококкового антитоксина в сыворотке больных в динамике, т. е. в начале и в конце бо­лезни. Принцип титрования основан на нейтрализации гемоли­тических свойств стафилококкового токсина антитоксином, содержащимся в сыворотке больного. Обычно при наличии стафилококкового заболевания уровень антитоксина в крови больных нарастает в течение болезни, что подтверждает этио­логическую роль стафилококка в данном заболевании. У резко ослабленных субъектов нарастание титра антитоксина может и не наблюдаться.